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esquizofrenia grave,Transmissão ao Vivo em Tempo Real, Curtindo Jogos Populares Online, Vivendo Emoções Intensas e Participando de Momentos Inesquecíveis com Jogadores do Mundo Todo..O casamento durou treze anos, até a morte de Isabel em 1539. A imperatriz contraiu febre durante o terceiro mês de sua sétima gravidez, o que resultou em complicações pré-natais que a levaram a abortar um filho natimorto. Sua saúde piorou devido a uma infecção e ela morreu duas semanas depois, em 1 de maio de 1539, com 35 anos. Carlos ficou tão triste pela morte de sua esposa que por dois meses ele se trancou em um mosteiro, onde orou e lamentou por ela em solidão. Ele nunca se recuperou da morte de Isabel, vestindo-se de preto pelo resto da vida para mostrar seu eterno luto e, ao contrário da maioria dos reis da época, ele nunca se casou novamente. Em memória de sua esposa, o imperador encarregou o pintor Ticiano de pintar vários retratos póstumos de Isabel; os retratos acabados incluíam o ''Retrato da Imperatriz Isabel de Portugal'' e ''La Gloria'', de Ticiano. Carlos manteve essas pinturas com ele sempre que ele viajava, e elas estavam entre as que ele trouxe com ele após sua aposentadoria no mosteiro de Yuste, em 1557.,Os territórios da Borgonha eram geralmente leais a Carlos durante todo o seu reinado. A importante cidade de Ghent se rebelou em 1539 devido aos pesados pagamentos de impostos exigidos por Carlos. A rebelião não durou muito tempo, no entanto, como resposta militar de Charles, com reforço do Duque de Alba, foi rápida e humilhante para os rebeldes de Ghent..
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